首頁上指標(biāo)的測量方法。浮游植物檢測葉綠素的測量方法

所有綠色植物都含有用于光合作用的色素。因此，測定水樣中色素的含量也是浮游植物檢測的一種定量方法。

雖然每門藻類的色素組成不同，但都含有葉綠素a，葉綠素a不僅含量高，而且是整個光合作用過程中最重要的能量傳遞中心。因此，葉綠素a值主要作為衡量浮游植物檢測蓄積量的指標(biāo)。

與計數(shù)法相比，葉綠素測定方法簡單、速度快，已成為測定浮游植物檢測常備存儲量的常用方法。同時，葉綠素值也可以通過某些轉(zhuǎn)換來指示初級生產(chǎn)的大小。

1、水樣采集

為測量葉綠素而收集水樣的方法與測量浮游植物檢測數(shù)量的方法相同。收集的水樣可以根據(jù)水中浮游植物檢測的數(shù)量來確定，通常在0.5到2升之間。如果浮游植物檢測含量特別低，則需要增加水樣的數(shù)量。

2、水樣保存

將水樣注入瓶中后，應(yīng)避免陽光直射，置于蔭涼處。如果進一步處理水樣需要較長時間(如隔天)，應(yīng)低溫(- 4℃)保存，并加入1%碳酸鎂懸浮液，每升水樣加入1ml，防止酸化。

3、吸濾

安裝過濾設(shè)備——包括砂芯過濾裝置(直徑50mm)、過濾瓶、負(fù)壓表、真空泵等。將過濾膜放入過濾器中。濾膜采用玻璃纖維濾膜或混合纖維酯類微孔濾膜(孔徑為0.8微米)。前者過濾速度快，當(dāng)需要過濾大量水樣時應(yīng)優(yōu)先使用。如果水樣中沒有添加碳酸鎂溶液，則應(yīng)在濾膜上過濾約0.5-1毫升碳酸鎂溶液，以防止酸化。過濾時的負(fù)壓不應(yīng)超過0.5個大氣壓(50千帕)。

過濾完成后，用鑷子小心地將濾膜取下，對折(浮游植物檢測樣品側(cè)面朝內(nèi))，然后用普通濾紙盡可能多地吸收和去除濾膜上的水分。如果不能立即提取，過濾膜應(yīng)在黑暗和低溫條件下保存?？稍谄胀ū淅鋬鍪冶４鏀?shù)天;在-20℃低溫冰箱中可保存30天。

4、提取

樣品先研磨，以提高色素提取效果。研磨可以使用玻璃砂漿或玻璃均質(zhì)器。將濾膜切成小片，放入砂漿或均質(zhì)器中，加入7-8毫升萃取劑，研磨幾分鐘。將研磨好的勻漿轉(zhuǎn)移到帶塞子和刻度的離心管中。用少量萃取劑沖洗砂漿或均質(zhì)器，并將沖洗液合并到離心管中，直到最終體積略小于10毫升。將管道塞蓋好，搖一搖，再置于黑暗、低溫區(qū)域。

提取溶液可以是90%丙酮、90%或100%甲醇、90%乙醇等。最常用的是丙酮。近年來，國際相關(guān)專家進行了研究和實驗，從提取效率、安全、健康等方面考慮，建議今后不應(yīng)使用丙酮，而應(yīng)使用乙醇作為萃取劑。多年來，丙酮在中國使用較多，考慮到數(shù)據(jù)的可比性，仍然可以繼續(xù)使用。

提取時間應(yīng)不少于6小時(乙醇或甲醇)或20小時(丙酮)，且不超過24小時。

5、離心機

將含有提取液的離心管放入離心機中，以3500-4000轉(zhuǎn)/分的速度離心10-15分鐘。將上層葉綠素萃取清液轉(zhuǎn)入定量試管中，再用少量丙醇懸浮沉淀，離心得到萃取清液。重復(fù)1-2次。最后，將提取物稀釋至10毫升。

6、光密度測量

讀取波長為665納米和750納米的光密度，以比色米為單位，具有一定的光程(1-3厘米)。在750納米處的光密度被用來校正吸收值。